饲料中淀粉含量的测定 氢氧化钾蛋白溶解度检测

饲料中淀粉含量测定与氢氧化钾蛋白溶解度检测方法及要点

饲料中淀粉含量测定方法

酸水解法

原理：通过盐酸水解淀粉为可测定的糖类物质，再测定还原糖含量并折算为淀粉含量。

步骤：

称取饲料样品（至0.0001g），加入2mol/L盐酸溶液，加热回流2小时。

水解产物经中和、定容后，测定还原糖含量。

局限性：高浓度盐酸可能同时水解纤维素，导致高纤维原料的淀粉结果偏高。

适用性：更适合纤维含量较低的样品。

旋光法

原理：利用淀粉水解产物具有旋光性，通过测定旋光度计算淀粉含量。

步骤：

样品用稀盐酸分解，将淀粉糊化并部分水解。

测定澄清溶液的总旋光度，校正其他物质和稀盐酸处理后的光学活性影响。

优势：不涉及还原糖测定，避免纤维素水解产物的干扰，结果更准确。

适用性：适用于各种类型的饲料原料，尤其是高纤维原料。

酶比色法

原理：利用淀粉酶将淀粉分解为麦芽糖等，通过比色法测定产物吸光度推算淀粉含量。

步骤：

样品经预处理去除干扰物质，加入α-淀粉酶（酶活力单位为1000U/g），在37℃、pH7.0条件下作用30分钟。

测定产物吸光度，结合标准曲线计算淀粉含量。

优势：操作简便，结果准确。

适用性：适用于各类饲料样品。

蒽酮比色法

原理：用乙醇溶液去除可溶性糖，再用溶解淀粉，蒽酮与淀粉反应生成蓝绿色化合物，测定吸光度计算淀粉含量。

步骤：

样品用80%乙醇提取可溶性糖，残留物用52%溶解淀粉。

加入蒽酮试剂，在640nm波长下测定吸光度。

优势：操作简便，结果准确。

适用性：适用于淀粉含量高、粗纤维含量低的谷物籽实饲料。

高效液相色谱法（HPLC）

原理：将淀粉水解为单糖，通过色谱柱分离测定，与标准品对比确定淀粉含量。

步骤：

样品前处理，将淀粉转化为单糖。

选用氨基柱，流动相为乙腈和水的混合溶液（比例为75:25），流速1.0mL/min，柱温30℃。

优势：分离效果好，结果准确。

适用性：适用于各类饲料样品，但设备成本较高。

氢氧化钾蛋白溶解度检测方法

原理

氢氧化钾蛋白溶解度反映蛋白质变性的情况。蛋白质变性越大，氢氧化钾蛋白溶解度越小。

通过测定样品在氢氧化钾溶液中的可溶性蛋白质含量与总粗蛋白质含量的比值，计算蛋白溶解度。

试剂与仪器

试剂：

0.2%氢氧化钾溶液（称取氢氧化钾2.35g，溶于1000ml水中）。

硫酸、混合催化剂（0.4g硫酸铜，6g硫酸钾或硫酸钠）、氢氧化钠、硼酸、混合指示剂、盐酸标准溶液等。

仪器：

分析天平、磁力搅拌器、离心机、凯氏蒸馏装置、滴定管等。

操作步骤

样品制备：

样品粉碎至过60目筛，准确称取2g（至0.0002g）于250ml碘量瓶中。

溶解与离心：

加入100.00ml氢氧化钾溶液（0.2%），磁力搅拌600转/min或振摇20分钟。

取50ml上清液转移至离心管内，以2700r/min离心10min。

粗蛋白质测定：

准确移取10.00ml上清液，加入消化管中，按凯氏定氮法测定粗蛋白质含量。

同时测定同一试样中总的粗蛋白含量。

计算：

蛋白溶解度（PS）%=（试样溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量/试样中总的粗蛋白含量）×。

注意事项

样品粉碎：粉碎至过60目筛，且不能产生高温，过度粉碎会使结果偏低。

搅拌与震荡：常温搅拌、震荡，震荡效果不如磁力搅拌溶解充分。

离心取上清液：必须用离心取上清液，过滤会有小的微溶颗粒过滤到滤液下，使测定结果偏高。

温度控制：溶解时温度控制在25±5℃，避免温度过高或过低影响结果。

搅拌速度：搅拌速度为700r/min，确保溶解充分。